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1. 農(nóng)殘試劑配置

緩沖溶液：取一包緩沖劑，加入500ml蒸餾水，溶解攪拌均勻，密閉、避光、陰涼處保存。

顯色劑：取顯色劑一瓶，加入15ml緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。

底物：取底物一瓶，加入15ml蒸餾水溶解，4℃冰箱中保存。

乙酰膽堿酯酶：取乙酰膽堿酯酶一瓶，用3ml緩沖溶液溶解， 4℃冰箱中保存。

注：因農(nóng)殘試劑生產(chǎn)廠家眾多，使用時請以試劑說明書為準(zhǔn)！

2. 樣品處理

選取有代表性的蔬菜樣品，擦掉樣品表面泥土，剪成1cm見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5ml緩沖溶液，振蕩1min～2min，倒出提取液，靜置3min～5min，待用。

注意：樣品不可用水沖洗，應(yīng)擦去表面泥土等雜物后取樣。為了保證取樣具有代表性，葉菜一般取來自不同植株葉片的葉尖部樣本，果菜從不同個體的表皮處取樣。

3. 對照溶液測試

在提取瓶中加入2.5ml緩沖溶液，再加入100ul酶液、100ul顯色劑，搖勻后于37℃放置15分鐘(每批樣品的控制時間必須一致)。15分鐘后再加入100μL底物搖勻,此時檢液開始顯色反應(yīng),應(yīng)立即倒入1cm比色皿，放入儀器比色池中，將儀器調(diào)到測量界面,按操作指示面板按鍵區(qū)的“對照”按鈕，儀器開始做對照。3分鐘后儀器自動對照完成，對照完成后將對照樣取出，保持儀器界面不變。

注意：對照測試必須在*通道進(jìn)行，對照測試△A應(yīng)＞0.3，若對照測試的結(jié)果小于以上數(shù)值時，儀器會自動提示“對照錯誤”，須重新做對照，以保證測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。(對照測試△A<0.3的原因：一是酶的活性不夠，二是反應(yīng)溫度太低。)

4. 樣品溶液測試

另取干凈的提取瓶，放入2.5ml樣品提取液，加入100ul酶液、100ul顯色劑，搖勻后于37℃放置15分鐘(放置的時間與對照液放置的時間必須一致)。15分鐘后再加入100μL底物搖勻,此時檢液開始顯色反應(yīng),應(yīng)立即倒入1cm比色皿，放入儀器比色池中，按操作指示面板按鍵區(qū)的“測量”按鈕開始測量，3分鐘后儀器測量完成，顯示測量結(jié)果。結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示，當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果，陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。

對陽性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

5. 說明

蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。

甲醛檢測方法

1. 試劑配置

甲醛試劑（一）

甲醛試劑（二）： 將甲醛試劑（二）①加少量熱水溶解，再加入甲醛試劑（二）②，冷卻后定容于50ml容量瓶

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！甲醛試劑（一）有腐蝕性；配制好的甲醛試劑（二）可使用一個月。

2. 樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.2g樣品放入哈希管中，加入5滴甲醛試劑（一）和10ml蒸餾水，混勻后蓋緊瓶蓋，放入沸水中加熱5min，取出冷卻至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾，以除去懸浮顆粒，此為待測溶液。

3. 空白

取蒸餾水10ml于10ml比色管中，加入甲醛試劑（二）1 ml，混合均勻，放入恒溫水浴鍋中50℃加熱15分鐘，取出冷卻至室溫，移入1cm比色皿中，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4. 測量

移取處理好的樣品溶液5ml于10ml比色管中，加入蒸餾水定容至10ml，然后再加入甲醛試劑（二）1 ml，混合均勻，放入恒溫水浴鍋中50℃加熱15分鐘，取出冷卻至室溫，移入1 cm比色皿中，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中甲醛濃度值X（mg/kg）。

吊白塊檢測方法

1. 試劑配置

吊白塊試劑（一）

吊白塊試劑（二）：將吊白塊試劑（二）①加少量熱水溶解，再加入吊白塊試劑（二）②，冷卻后定容于50ml容量瓶

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！吊白塊試劑（一）有腐蝕性；配制好的吊白塊試劑（二）可使用一個月。

2. 樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.2g樣品放入哈希管中，加入5滴吊白塊試劑（一）和10ml蒸餾水，混勻后蓋緊瓶蓋，放入沸水中加熱5min，取出冷卻至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾，以除去懸浮顆粒,此為待測溶液。

3. 空白

取10ml蒸餾水于10ml比色管中，加入吊白塊試劑（二）1 ml，混合均勻，放入恒溫水浴鍋中50℃加熱15分鐘，取出冷卻至室溫，移入1cm比色皿中，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4. 測量

移取處理好的樣品溶液5ml于10ml比色管中，加入蒸餾水定容至10ml，然后再加入吊白塊試劑（二）1 ml，混勻后放入恒溫水浴鍋中50℃加熱15分鐘，取出冷卻至室溫，移入1 cm比色皿中，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中吊白塊濃度值X（mg/kg）。

雙氧水檢測方法

1. 試劑配置

     雙氧水試劑（一）

     雙氧水試劑（二）

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！雙氧水試劑（一）有腐蝕性，雙氧水試劑（二）有毒。

2. 樣品處理

準(zhǔn)確稱取1.0g樣品放入哈希管中，加2ml雙氧水試劑（一）和6ml蒸餾水，混勻后蓋緊瓶蓋，放入恒溫水浴鍋50℃下加熱10min，取出冷卻至室溫，用0.45μm 微孔濾膜過濾，濾液移入10ml比色管中，加0.2ml雙氧水試劑（二），再加蒸餾水至10ml刻度，此為待測溶液。

3. 空白

向比色管中加入2ml雙氧水試劑（一）和0.2ml雙氧水試劑（二），再加蒸餾水至10ml刻度，混勻，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4. 測量

 向待測液中加入2ml雙氧水試劑（一）和0.2ml雙氧水試劑（二），再加蒸餾水至10ml刻度，搖勻，轉(zhuǎn)入1cm比色皿中，放入儀器比色池中進(jìn)行測量，測量完成后，儀器會自動顯示樣品濃度結(jié)果X（mg/kg）。

亞硝酸鹽檢測方法

1.試劑配置

亞硝酸鹽試劑（一）：加少量熱蒸餾水溶解，冷卻后定容于50mL容量瓶。

亞硝酸鹽試劑（二）：加蒸餾水溶解，定容于50mL容量瓶。

亞硝酸鹽試劑（三）： 將兩種亞硝酸鹽試劑（三）溶于少量熱水中，冷卻后定容于50ml容量瓶。

亞硝酸鹽試劑（四）：將亞硝酸鹽試劑（四）①加亞硝酸試劑（四）②定容于100mL棕色容量瓶，避光保存。

亞硝酸鹽試劑（五）：加蒸餾水溶解，定容于100mL棕色容量瓶，避光保存。

注意：除試劑（一）需常溫保存外所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！亞硝酸鹽試劑（一）容易析出，請用50℃左右水浴加熱1分鐘后使用。配制好的亞硝酸鹽試劑（五）有腐蝕性，可放置一個月左右，溶液變綠后不能使用。

2.樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.1g經(jīng)攪碎混勻的試樣，置于哈希管中，加入1mL亞硝酸鹽試劑（一）和5mL的蒸餾水，密閉后于沸水浴中加熱15min，取出后冷卻至室溫，然后一面轉(zhuǎn)動一面加入1mL亞硝酸鹽試劑（二），搖勻，再加入1mL亞硝酸鹽試劑（三），以沉淀蛋白質(zhì)。加水至10ml刻度，搖勻，放置0.5小時，除去上層脂肪，余液用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液備用。

3.對照測試

取5ml蒸餾水于10ml比色管中，加入0.1mL亞硝酸鹽試劑（四），混勻，放置5min后加入0.2ml試劑（五），混勻，靜置15分鐘，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4.樣品測定

取5ml待測溶液于10ml比色管中，加入0.1亞硝酸鹽試劑（四）混勻，放置5min后加入0.2ml試劑（五），混勻，靜置15分鐘，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中亞硝酸鹽濃度值X（mg/kg）。

六價鉻檢測方法

1.試劑配置

    六價鉻試劑（一）：加蒸餾水稀釋，定容于100mL容量瓶

    六價鉻試劑（二）：加蒸餾水稀釋，定容于100mL容量瓶 

六價鉻試劑（三）：加蒸餾水稀釋，定容于100mL容量瓶

六價鉻試劑（四）：加蒸餾水稀釋，定容于100mL容量瓶

六價鉻試劑（五）：將六價鉻試劑（五）①溶解于六價鉻試劑（五）②中，加水稀釋至100ml，儲存于棕色瓶中置冰箱內(nèi)保存。

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！六價鉻試劑（一）、六價鉻試劑（二）、六價鉻試劑（三）、六價鉻試劑（四）有腐蝕性；當(dāng)配制好的六價鉻試劑（五）溶液色變深后不能使用。

2.樣品處理

操作步驟

① 將待測的糧食、蔬菜、水果類樣品洗凈晾干，碾碎，混勻備用。禽蛋、水產(chǎn)等洗凈、晾干，取可食部分，混勻備用。

② 取經(jīng)過預(yù)處理的均勻樣品1.000g于哈希管中（敞開），加入2.0mL試劑（一）純硝酸，4.0mL試劑（二）過氧化氫溶液，輕輕搖勻，放入亞臨界水萃取儀中，從溫度升到140℃時開始計時，保持恒溫lh，同時做試劑空白，取出哈希管待自然冷卻后，將消解液移入l0mL比色管中，將哈希管用水洗凈，合并洗液于比色管中，用水稀釋至10ml刻度，混勻、待測。

3.對照測試

取10ml蒸餾水于10ml比色管中，向比色管內(nèi)加入0.1ml六價鉻試劑（三）和六價鉻試劑（四），混勻，再加入0.4ml試劑（五）搖勻，放置10min后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4.樣品測定

取待測溶液，加蒸餾水稀釋至刻度，再向比色管內(nèi)加入0.1ml六價鉻試劑（三）和六價鉻試劑（四），混勻，再加入0.4ml試劑（五）搖勻，放置10min后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中六價鉻濃度值X（mg/kg）。

重金屬檢測方法

1.試劑配置

    重金屬試劑（一）

    重金屬試劑（二）

重金屬試劑（三）：加少量蒸餾水溶解，定容于100ml容量瓶

重金屬試劑（四）：加少量蒸餾水溶解，定容于100ml容量瓶

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！重金屬試劑（一）、 重金屬試劑（二）有腐蝕性。

2.樣品處理

操作步驟

③ 將待測的糧食、蔬菜、水果類樣品洗凈晾干，碾碎，混勻備用。禽蛋、水產(chǎn)等洗凈、晾干，取可食部分，混勻備用。

④ 取經(jīng)過預(yù)處理的均勻樣品1.0g于哈希管中，加入2mL重金屬試劑（一），2mL重金屬試劑（二），4ml蒸餾水，輕輕搖勻，蓋緊上蓋，放入超聲波提取儀中提取10分鐘，取出哈希管待自然冷卻后，打開上蓋，過濾將溶液移入10ml比色管中，加重金屬試劑（四）調(diào)節(jié)溶液PH=9，加水至刻度，此為待測溶液。

3.對照測試

取10ml蒸餾水于比色管內(nèi)，加入1ml重金屬試劑（三），混勻，放置10min后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4.樣品測定

取待測溶液，加蒸餾水稀釋至刻度，再向比色管內(nèi)中加入1ml重金屬試劑（三），混勻，放置10min后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中重金屬濃度值X（mg/kg）。

二氧化硫檢測方法

1. 試劑配置

     二氧化硫試劑（一）：加蒸餾水溶解，定容于500ml容量瓶

     二氧化硫試劑（二）：加蒸餾水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫試劑（三）

     二氧化硫試劑（四）：加蒸餾水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫試劑（五）：將兩種二氧化硫試劑（五）混合，用熱水溶解，冷卻后定容于50ml容量瓶

     二氧化硫試劑（六）：將二氧化硫試劑（六）①溶解定容于50ml容量瓶中，取出20ml于100ml容量瓶中，滴加二氧化硫試劑（六）②混勻使溶液由紅變黃，加水至刻度

     二氧化硫試劑（七）：加蒸餾水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫試劑（八）

注意：所有試劑均需避光、低溫（冰箱4℃）保存！二氧化硫試劑（一）有毒，二氧化硫試劑（七）、二氧化硫試劑（八）有腐蝕性。

2. 樣品處理

2.1  水溶性固體樣如白砂糖稱取1.0g，用少量水溶解，置于10ml比色管中，加入0.4ml二氧化硫試劑（七），5分鐘后加入0.4ml二氧化硫試劑（八），然后加入2ml二氧化硫試劑（一），加水至刻度，混勻，此為待測溶液。

2.2  其他固體樣如餅干、粉絲稱取1.0g研磨均勻的試樣，以少量水潤濕并移入10ml比色管中，加入2ml二氧化硫試劑（一），浸泡4小時以上，若上層溶液不澄清可加入二氧化硫試劑（四）及二氧化硫試劑（五）各0.25ml，混勻，過濾，加水至刻度，此為待測溶液。

2.3  液體試樣如葡萄酒可直接吸取1mL，置于10ml比色管中，用少量水稀釋，加入2ml二氧化硫試劑（一），搖勻，zui后加水至刻度，混勻，此為待測溶液。

3. 空白

取一支干凈的10mL比色管，準(zhǔn)確加入二氧化硫試劑（一）10ml， 1ml二氧化硫試劑（二），1ml二氧化硫試劑（三）及1ml二氧化硫試劑（六），混勻，放置20分鐘后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入儀器相應(yīng)比色池中，按操作指示面板區(qū)的“對照”鍵進(jìn)行對照，對照完成后，儀器會自動記錄對照結(jié)果，并在顯示屏下方顯示為“對照測量完成”。

4. 測量

取待測溶液5ml于10mL比色管中，加入二氧化硫試劑（一）至10ml刻度，再加入1ml二氧化硫試劑（二），1ml二氧化硫試劑（三）及1ml二氧化硫試劑（六），混勻，放置20分鐘后，轉(zhuǎn)入1cm比色皿，放入已經(jīng)做過對照的儀器通道中按操作提示面板區(qū)的“測量”鍵進(jìn)行測量，測量完成后，儀器自動顯示樣品中二氧化硫濃度值X（mg/kg）。

備注：本儀器在室溫20°左右測量zui準(zhǔn)確。

附錄1  常見故障及原因

如果操作不當(dāng)，相應(yīng)的會出現(xiàn)下列出錯提示信息。都可按

取消返回。

下表中若未說明生產(chǎn)問題的原因，則與錯誤提示信息相同。

附錄2  各物質(zhì)*

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